L Wnt-3A(小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞)
細(xì)胞名稱(chēng)：L Wnt-3A 小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞
組織來(lái)源：C3H/An小鼠皮下結(jié)締組織
培養(yǎng)條件：DMEM +0.4mg/mL G-418 +10% FBS
形 態(tài)：貼壁；成纖維細(xì)胞樣
背 景：L-M(TK-) 細(xì)胞用Wnt-3A表達(dá)載體轉(zhuǎn)染并在含G418的培養(yǎng)基中篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株。Wnt-3A基因編碼一個(gè)有變異的信號(hào)功效分泌性糖蛋白。Wnt基因控制胚胎發(fā)過(guò)程中的許多模式形成和生長(zhǎng)事件。這些細(xì)胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白。它們是目前生產(chǎn)Wnt-3A條件培養(yǎng)基的*好來(lái)源。由于這種條件培養(yǎng)基還包含Wnt-3A蛋白外的其他因子，對(duì)于涉及Wnt-3A條件培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)有必要用其來(lái)源細(xì)胞株L cells (ATCC CRL-2648)作對(duì)照。
L Wnt-3A(小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞)操作說(shuō)明：
1)對(duì)于常溫運(yùn)輸?shù)募?xì)胞，收到細(xì)胞后，檢查是否有運(yùn)輸問(wèn)題，即細(xì)胞培養(yǎng)瓶或管是否破損，細(xì)胞培養(yǎng)液是否溢出。若沒(méi)有運(yùn)輸問(wèn)題，請(qǐng)75%酒精**后，保留封口膜，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置。嚴(yán)格檢查培養(yǎng)箱的參數(shù)：溫度，濕度和CO2濃度。細(xì)胞靜置時(shí)間一般為6-12小時(shí)后，細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，即可開(kāi)始后續(xù)操作。選用正確的細(xì)胞培養(yǎng)體系，L Wnt-3A(小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)。條件允許，培養(yǎng)的前三天內(nèi)做細(xì)胞拍照記錄，通過(guò)郵件發(fā)送給我們做及時(shí)狀態(tài)跟蹤。
2)對(duì)于干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞，請(qǐng)取出冷凍管后，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。然后將其復(fù)蘇培養(yǎng)，次日更換培養(yǎng)液。
L Wnt-3A(小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞)注意事項(xiàng)：
1)細(xì)胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開(kāi)封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀(guān)察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以離心去掉，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀(guān)察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀(guān)察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問(wèn)題解決。
2)對(duì)于生長(zhǎng)緩慢的貼壁細(xì)胞：可采用適當(dāng)?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度，或隔日換液的方法來(lái)保證細(xì)胞的狀態(tài)和生長(zhǎng)速度。
3)對(duì)于生長(zhǎng)不均的貼壁細(xì)胞：在培養(yǎng)過(guò)程中若出現(xiàn)細(xì)胞分布明顯不均時(shí)（即某一區(qū)域細(xì)胞已重疊生長(zhǎng)，而旁邊則為一塊空白），此時(shí)可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重新打散，貼壁，加入新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
L Wnt-3A(小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞)下面介紹幾種細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中常見(jiàn)的污染：
一)桿菌污染：培養(yǎng)基中加入***可以減少此種污染，但也不是**的。
二)支原體污染：傳說(shuō)中的黑焦蟲(chóng)，長(zhǎng)得暴快。24小時(shí)就滿(mǎn)視野都是了。污染源大多數(shù)情況下是培養(yǎng)用血清。
三)***污染：似乎無(wú)處不在，而且頑固得很。長(zhǎng)得暴快(12h就能在細(xì)胞上面密布)。培養(yǎng)液澄清。低倍顯微鏡下像黑色的沙子鋪在細(xì)胞上，高倍鏡下呈樹(shù)枝狀或葡萄狀。
四)霉菌污染、比較常見(jiàn)的一種污染，常常來(lái)源于污染的空氣、水和器械。
